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遺伝子増幅について

 投稿者:メール  投稿日:2020年 1月20日(月)15時06分41秒 s9-sknsi04.minato.s.kaiyodai.ac.jp
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  初めてこちらを利用させていただきます。
学生です。

現在研究をしている内容について質問させていただきます。

目的配列を挟む形で、5’⇒3’方向のプライマーと3'⇒5’方向のプライマーを作製し、それらを用いて1st strand cDNAを鋳型として、PCR法により遺伝子を増幅する段階の話です。
現在、5’⇒3’方向のプライマーが3種類と、3'⇒5’方向のプライマーは2種類あるのですがこれらの組み合わせによって目的配列の一部数塩基が置換されてしまい、先行研究に対して再現性の得られない状況が続いています。

自分の知識では原因がわからず、こちらに来ましたが、プライマーの位置が変わるとそれによって挟まれている塩基配列が変わることはあり得るのでしょうか?

ご教示いただけると幸いです。
 
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